离子交换层析中,为什么用氯离子洗脱阴离子
阴离子交换柱的填料是正电填料,在低盐条件下可以通过电荷相互作用吸附样品中的阴离子和负电荷物质(如DNA).这些带负电的物质由于其带电量不同,分子大小不同,因而与正电填料之间的结合力也就不同.用梯度的氯离子(一般用氯化钠梯度,例如从100mM氯化钠线性梯度升高到1M氯化钠)洗脱挂柱样品时,氯离子会和结合上的物质竞争结合正电填料,伴随着氯离子浓度的不断升高,氯离子的竞争作用越来越强,与填料结合的物质会按照亲和力从弱到强依次洗脱下来,形成独立的洗脱峰,从而将这些物质分开.
阳离子交换柱与之正好相反,柱子填料为负电荷,用钠离子洗脱结合的正电物质.
亲和层析
配体偶联在介质上,纯化能与配体结合的生物分子;通常一步便能得到高纯的样品;配体的特异性越强,所获产品纯度越高用亲和介质提纯单抗非常方便,以重组蛋白A的载量高;蛋白G则能结合更多不同源的IgG
金属鳌合介质(Chelating Sepharose Fast Flow)可反复鳌合不同金属,再用已结合依赖不同金属的蛋白,一种介质可做多种纯化工作
其他常用配体包括:肝素-纯化.酶III,凝血因子脂酶等Cibacron Blue(颜料)-纯化白蛋白,干扰素等外源凝集素如球蛋白A-多糖,糖蛋白等Glutathione谷胱甘三肽-重组融合蛋白等等.
可自行把所需配体偶联到活化偶联介质,的是NHS activated 4 Fast Flow和CNBr activated 4 FF;要注意化学基好不会参与配体和被纯化生物分子的结合作用中
TLC 层析技术
以下几点由高新科技为您给予,期待对行业的小伙伴有些协助。 薄层色谱法通称TLC,是在50年代从经典柱色谱法山石色谱法基本上发展壮大下去的一种色谱仪技术。六十年代后,大家对薄层色谱法的规范化、规范性及扩张运用等领域开展了很多工作中,使该方式 日趋完善。已经变成当代有机化学、纤维材料分离出来与分析的主要方式 。融合柱分离出来的薄层色谱技术可以具备完全的实操实际意义。
气相色谱法(GC)是在柱层析基本上发展
壮大下去的一种新式仪器设备方式 ,是色谱发展趋势中为完善的技术性。它以稀有气体为流动性相,利用经获取、提纯、浓缩后的农yao药(Ops)引入气相色谱柱,提温汽化后,不一样的Ops在稳固看中分离出来,经不一样的探测器检验扫勾画出气相色谱图,根据保存期来定性,根据峰或峰总面积与标曲对比来定量,具备即定性又定量。