大肠实验方法原理
所谓大肠菌群,是指在37℃培养24h 内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革蓝氏阴性无芽孢的总称。主要由肠科中四个属内的细菌组成,即埃希氏属、柠檬酸属、克雷伯氏菌属和肠属。
水的大肠菌群数是指100 mL水检样内含有的大肠菌群实际数值,以大肠菌群近似数(MPN)表示。在正常情况下,肠道中主要有大肠菌群、粪链球菌和厌氧芽孢等多种细菌。这些细菌都可以随人畜排泄物进入水源,由于大肠菌群在肠道内数量多,所以,水源中大肠菌群的数量,是直接反映水源被人畜排泄物污染的一项重要指标。目前,国际上已公认大肠菌群是粪便污染的指标。因而对饮用水必须进行大肠菌群的检查。
大肠菌群无需稀释检测操作步骤大肠菌群检测操作步骤
1 水样稀释
检测所需水样为100mL。若水样污染严重,可对水样进行稀释。取10 mL水样加入到90 mL无菌水中,必要时可加大稀释度,水样按照10倍逐级稀释。
2 定性反应
用100 mL的无菌稀释瓶量取100 mL水样,加入培养基粉末,混摇均匀使之完全溶解后,放入44.5℃的培养箱内培养24h。
3 51孔定量盘法
3.1 用100 mL的无菌稀释瓶量取100 mL水样,加入培养基粉末,混摇均匀使之完全溶解。
3.2 将前述100mL水样全部倒入51孔无菌定量盘内,以手抚平定量盘背面以赶除孔气泡,然后用程控定量封口机封口。放入44.5℃的培养箱内培养24h。
3.3 无需稀释检测范围:1-200MPN/100mL粪大肠菌群(耐热大肠菌群)
4 97孔定量盘法
4.1 将100mL水样全部倒入97孔无菌定量盘内,其余步骤与6.3.1、6.3.2条款相同。
4.2 无需稀释检测范围:1-2419MPN/100mL粪大肠菌群(耐热大肠菌群)
滤膜法(MF,membranefilter)滤膜法:是目前为流行的检测水中大肠群的方法。滤膜法的具体步骤是首先将一定量的水体样本注入0.45μm的滤膜过滤,经过抽滤,水中的细菌则被留在滤膜上,将滤膜贴于品红亚硫酸钠培养基上培养24h,温度为恒温37℃,这使得菌群因发酵乳糖而使得滤膜出现紫红色,通过计算滤膜上的菌落进而计算出单位样本中的大肠的数量。
用ISO9308-1规定的滤膜法测定水中大肠回收率均值为94.7%,批内变异系数小于10%,检出限为500mL水样可检出1个CFU。该方法费用较低、原理简单、利于推广,但检测时间相对较长、步骤繁琐、干扰因素多,不适于大量样品的分析,无法满足污染物品快速检测需求。