用trizol法提取RNA的方法及每一步的原理.
实验步骤：
1. 提取组织RNA时，每50~100mg组织用1ml Trizol试剂对组织进行裂解：提取细胞RNA时，先离心沉淀细胞，每5~106个细胞加1ml Trizol后，反复用枪吹打或剧烈震荡以裂解细胞；
2. 将上述组织或细胞的Trizol裂解液转入EP管中，在试问15~30℃下放置5分钟；
3. 在上述EP管中，按照每1mlTrizol后加0.2ml氯仿的量加入氯仿，盖上EP管盖子，在手中用力震荡15秒，在室温下（15~30℃）放置2~3分钟后，12000g（2~8℃）离心15分钟；
4. 去上层水相置于新EP管中，按照每1mlTrizol加0.5ml异丙醇的量加入异丙醇，在室温下（15~30℃）放置10分钟后，12000g（2~8℃）离心10分钟；
5. 弃上清，按照每1ml Trizol加1ml75% 乙醇进行洗涤，涡旋混合，7500g（2~8℃）离心5分钟，弃上清；
6. 让沉淀的RNA在室温在自然干燥；
7. 用Rnase-free water 溶解RNA沉淀
各试剂的作用：
1、 TRIZOL
主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚得到释放。苯酚虽可有效地变性蛋白质，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中还加入了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase（RNA酶）。
TRIZOL是从细胞和组织中提取总RNA的即用型试剂，在样品裂解或匀浆过程中，TRIZOL能保持RNA完整性。加入氯仿后，溶液分为水相和有机相，RNA在水相中。取出水相，用异丙醇可沉淀回收RNA。
※0.1%的8－羟基喹啉可以抑制RNase，与氯仿联合使用可增强抑制作用。
※异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质并使蛋白质二级结构消失，导致细胞结构降解，核蛋白迅速与核酸分离。
※β-巯基乙醇的主要作用是破坏RNase蛋白质中的二硫键。
2、 氯仿
为有机溶剂与水互不相溶，RNA（核糖核“酸”的盐型）是离子化合物，溶于水相
3、异丙醇
能与与任意比例的水混合，因此加入异丙醇，能够夺取RNA/DNA周围的水分，RNA/DNA能够聚集而发生沉淀。
双链RNA提取方法以及每一步的原理是什么
真菌菌丝的总RNA的提取
RNA提取缓冲液（CTAB）：2%
CTAB（W/V），2%
聚乙烯吡咯烷酮PVP（W/V），100
mM
Tris-HCl（pH8.0,DEPC处理的水配置），25mM
EDTA,
0.5g/L
亚精胺Spermidine，2.0M
NaCl，2%巯基乙醇（V/V，使用前加入）。由于在高温灭菌条件下，Tris-HCl要和DEPC发生反应，所以配RNA提取缓冲液时直接用DEPC
处理的水配制即可。
SSTE：1
M
NaCl，0.5%
SDS（W/V），10
mM
Tris-HCl
pH8.0，1.0
mM
EDTA
10M
LiCl
直接用蒸馏水配10M
LiCl，加1‰的DEPC过夜后，高温灭菌。
3M
NaAc
氯仿:异戊醇（24:1）
酚（pH4.5）:氯仿:异戊醇（25:24:1）
DEPC处理水
用1‰的DEPC处理蒸馏水过夜，高温灭菌
无水乙醇
70%酒精
1.
实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热，离心管中加入ME（巯基乙醇）（10mL加80ul，50mL中加入300ul）。
2.取约0.8g菌丝体（液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了），在液氮中迅速磨成精细粉末，装入50
mL离心管，按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液，颠倒混匀。
3.
65℃水浴3-10
min，期间混匀2-3次
4.
加入等体积的酚（注意是酸酚pH4.5）:氯仿:异戊醇（25:24:1）抽提（10,000
rpm，4℃，5
min）
5.
取上清，等体积的氯仿:异戊醇（24:1）抽提（10,000
rpm，4℃，5
min）
6.
加入1/4V体积10M
LiCl溶液，4℃放置6hr以上(或过夜)
7.
10,000
rpm，4℃离心20
min
8.
弃上清，用500
ulSSTE溶解沉淀
9.
酚:氯仿:异戊醇（25:24:1）抽提两次,
氯仿:异戊醇（24:1）抽提1次（10,000
rpm，4℃，5
min）
10.
加2V体积的无水乙醇，在-70℃冰箱沉淀30
min以上
11.
12,000
rpm，4℃离心20
min
12.
弃上清。沉淀用70%酒精漂洗一次，干燥
13.
加200
ul的DEPC处理水溶解
14.
用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
（在抽提过程中，若蛋白质含量或其它的杂质还较多，可以增加抽提次数）
注意：提取RNA请尽量在低温下操作，如果条件不容许，在室温下操作的时间要尽可能的短。
怎样从总RNA中提取mRNA?原理是什么？
大多数真核细胞mRNA的3’端通常具有由20-30个腺苷酸组成的polyA尾巴，寡聚胸腺嘧啶脱氧核糖核苷（OligoT）可以与之配对结合，这就是提取mRNA最基本的原理。具体到实验手段上，现在磁珠法、纤维素柱层析法都有在用。
磁珠法一般是用生物素标记OligoT，亲和素标记磁珠（生物素和亲和素间具有高度亲和力）。实验时生物素标记的OligoT与mRNA的polyA高效杂交形成复合体，此复合体又与标有亲和素的磁珠结合。用磁性分离架就可以将这堆复合物分离出来。最后用无RNase去离子水将mRNA从复合物中洗脱下来即可。
寡聚dT纤维素柱层析法的大致流程：总RNA流经寡聚dT纤维素柱时，在高盐缓冲液中，带polyA尾的mRNA被特异地结合在柱上。降低盐浓度，mRNA被洗脱。一般过两次柱后，就可得到较高纯度的mRNA。
当然有些mRNA没有polyA尾巴，这种就比较难办了，我最近的实验就是在对付这种东西。如果你是拿mRNA做RT-PCR，其实一般是不必分离mRNA的，设计好引物就可以用总RNA做了。
RNA提取原理
RNA抽取一般使用Trizol法抽提:
Trizol是一种总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速裂解细胞，抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。
Trizol作用原理:
在匀质化或溶解样品中，Trizol试剂可保持RNA的完整性，同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后，裂解液分层成水相和有机相。RNA存在于水相中。
水相转移后，RNA通过异丙醇沉淀回收。移去水相后，用乙醇可从中间相沉淀得到DNA，加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质。
扩展资料:
抽提RNA的使用目的
RNA用于不同的后续实验，其质量要求不尽相同。
cDNA文库构建要求RNA完整而无酶反应抑制物残留；
Northern对RNA完整性要求较高，对酶反应抑制物残留要求较低；
RT-PCR对RNA完整性要求不太高，但对酶反应抑制物残留要求严格。因此，明确实验目的是进行后续实验的首要条件。
参考资料来源:百度百科-RNA
trizol法提取rna原理是什么？
Trizol作用原理：
在匀质化或溶解样品中，Trizol试剂可保持RNA的完整性，同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后，裂解液分层成水相和有机相。RNA存在于水相中。
水相转移后，RNA通过异丙醇沉淀回收。移去水相后，用乙醇可从中间相沉淀得到DNA，加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质。
扩展资料
RNA和DNA一样，也是由各种核苷酸通过3′，5′-磷酸二酯键连接构成的多核苷酸链，但与DNA有一系列差异。
1、在化学组成方面，RNA含核糖而不含脱氧核糖。含尿嘧啶而不含胸腺密啶。例外的是，每个tNA分子含有一个胸腺嘧啶，这是在RNA链合成后由尿嘧啶甲基化生的，此外，前面已提到，少数DNA含有少量核糖，但这些个别的例外并不能以此否定两类核酸组成上的差异。
2、RNA一级结构的概念虽与DNA相同.但其基本结构单位是核糖核苷酸而不是脱氧核糖核苷酸。此外，部分RNA5′端或3′端有特殊的核苷酸序列，而且RNA一级结构中没有DNA那样复杂的顺序组织。
3、绝大多数RNA为单链分子，单链可自身折迭形成发夹（hairpin）样结构而有局部双螺旋结构的特征，这是各种RAN空间结构的共同特征。RNA局部双螺旋结构中碱基互补配对规律是A对U和G对C。由于RNA分子内部不能全面形成碱基配对，故其碱基克分子比A不等于U，G不等于C，不存在DNA碱基比例的 Chargaff规律。
实验1：总RNA的提取——Trizol
实验一：细胞中总RNA的提取及鉴定
一、目的：
掌握Trizol提取总RNA的原理和步骤，学习电泳鉴定总RNA的方法。
二、原理：
RNA是核酸，具有较好的水溶性。提取RNA首先破碎细胞，然后用提取液将RNA溶出，反复抽提去除蛋白质，加入乙醇沉淀RNA，将RNA沉淀溶解备用。
常用的试剂为Trizol，该试剂可以破坏细胞使RNA释放出来的同时，同时使RNA酶变性失活，保护RNA的完整性。Trizol的主要成分为异硫氰酸胍、酚和B-巯基乙醇，异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质，并使蛋白质二级结构消失，细胞结构降解，核蛋白迅速与核酸分离。提取中加入氯仿，主要用处是用来分相，加速有机相和水相的分层，上层为水相，PH 5.1左右，只有RNA分子留在水相，DNA分子沉淀在酚与溶液的界面。加入异丙醇，主要沉淀大分子rRNA和mRNA。最后加入乙醇主要是洗涤异丙醇，也可以溶解一部分蛋白，去除杂质。
判断RNA 的质量主要有两个标准，一是完整性（是否被降解），二是纯度。RNA的完整性主要通过电泳分析来阐明，未降解的总RNA电泳时在凝胶中会出现28S、18S和5S rRNA对应的条带，如果有DNA污染则在RNA后会发现基因组DNA对应的条带。RNA的纯度可以通过分光光度计进行测定的A260／A280值来判断。
三、步骤：
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